کشت کراتینوسایت های انسانی در محیط کشت عاری از سرم

چکیده زمینه و هدف: سلول های کراتینوسایت انسانی ابزار مفیدی جهت انجام مطالعات سلول درمانی به منظور بهبود سوختگی ها و زخم های مزمن محسوب می شوند. همچنین کراتینوسایت ها با کارائی بالا به سلول های پرتوان القائی تبدیل می شوند. در این مطالعه جزئیات مربوط به روش های جداسازی، کشت و تکثیر سلول های کراتینوسایت از نمونه پوستی ختنه گاه انسان، توصیف شده است. روش بررسی: در این مطالعه که از نوع آزمایشگاهی، و مشاهده ای بود. نمونه مربوط به پوست ختنه گاه نوزادانی که به تازگی ختنه شده بودند تحت شرایط استریل به آزمایشگاه منتقل شد. از آنزیم دیسپاز جهت جداسازی اپیدرم از درم و از آنزیم تریپسین برای جداسازی سلول های کراتینوسیت موجود در لایه اپیدرم استفاده شد. سلول ها در ظروف کشت پوشش داده شده با کلاژن نوع i انسانی و محیط کشت اپی لایف عاری از سرم، کشت داده شدند. ارزیابی های مورفولوژیک و ایمونوسیتوشیمی جهت تایید ماهیت سلول های جداسازی شده انجام شد. یافته ها: نتایج ارزیابی های انجام شده نشان داد که سلول های جداسازی شده دارای مورفولوژی تیپیک کراتینوسایت ها بوده و آنتی ژن اختصاصی کراتینوسایت ها ck14 را هم بیان می کنند. هر 4 الی 5 روز یکبار سلول ها به نسبت 1 به 2 پاساژ داده شدند. بعد از پاساژ 10 تکثیر سلول ها به شدت کاهش یافته و از نظر مورفولوژیک ظاهری پهن و نازک پیدا کردند. نتیجه گیری: در این مطالعه نحوه جداسازی و تکثیر کراتینوسایت های انسانی مشتق از نمونه پوستی ختنه گاه انسان در آزمایشگاه بهینه سازی شد. از آنجاییکه بیش از بیست بار سلول ها با موفقیت جداسازی شدند می توان نتیجه گرفت ، روش معرفی شده در این مقاله که نسبت به روش های پیشین همراه با مقداری تعدیل و بصورت جزیی تری توصیف شده است در آزمایشگاه های دیگر نیز تکرار پذیر است. کلید واژه ها: کراتینوسایت های انسانی، نمونه پوست ختنه گاه انسان، سایتوکراتین 14، محیط عاری از سرم وصول مقاله :18/3/92 اصلاحیه نهایی:14/10/92 پذیرش:17/10/92